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目的：外泌體是從正常細胞和腫瘤細胞釋放的納米囊泡，在細胞培養(yǎng)上清液和人類生物液體中可檢測到。雖然以前的研究已經(jīng)探索了從癌細胞釋放的外泌體，但很少了解正常細胞釋放的外泌體的功能。自然殺傷（NK）細胞表現(xiàn)出對轉(zhuǎn)移性或血液惡性腫瘤的快速免疫，并且已經(jīng)在臨床上開發(fā)NK細胞的抗腫瘤特性。然而，源自NK細胞的外泌體的特征和功能仍然是未知的。在本研究中，研究人員在體外和體內(nèi)探討了NK細胞衍生的外泌體介導的抗侵襲性黑色素瘤的抗腫瘤作用。

方法：用增強的螢火蟲螢光素酶（effluc）和thy1.1基因轉(zhuǎn)染B16F10細胞，用微珠免疫篩選thy1.1陽性細胞。使用RT-PCR，蛋白質(zhì)印跡和熒光素酶活性測定來鑒定所得到的B16F10/effluc細胞。通過超速離心和密度梯度超速離心分離來自NK-92MI細胞的外泌體（NK-92 Exo）。研究人員還進行了酶聯(lián)免疫吸附測定法來測量保留在NK-92 Exo細胞中的細胞因子。NK-92外泌體通過透射電子顯微鏡和蛋白質(zhì)印跡進行表征。使用生物發(fā)光成像系統(tǒng)（BLI）和CCK-8測定法測定NK-92Exo對癌細胞的體外細胞毒性。為了研究NK-92 Exo對健康細胞的可能副作用，研究人員還使用人腎Phoenix™-Alymp細胞系進行BLI和CCK-8測定。流式細胞術(shù)和Western印跡證實，NK-92外泌體誘導B16F10/effluc細胞凋亡。在體內(nèi)，使用B16F10/effluc細胞異種移植模型來檢測NK-92外泌體的免疫治療效果。將NK-92 Exo注射到腫瘤中，并使用IVIS Lumina成像系統(tǒng)和超聲成像監(jiān)測腫瘤生長進程。在體內(nèi)實驗后監(jiān)測腫瘤質(zhì)量。

結(jié)果：RT-PCR和Western blotting檢測了B16F10/effluc細胞中的effluc基因表達和蛋白水平。使用BLI測定發(fā)現(xiàn)B16F10/effluc活性隨著細胞數(shù)量的增加而增加。對于NK-92 Exo表征，western blotting檢測了超速離心和密度梯度分離的外泌體。結(jié)果證實，NK細胞衍生的外泌體表達兩種典型的外泌體蛋白，即CD63和ALIX。通過蛋白質(zhì)印跡分析證明NK-92 Exo提供了兩種功能性NK蛋白，即穿孔素和FasL。此外還證實了FasL是在膜上表達的。酶聯(lián)免疫吸附測定結(jié)果表明，NK-92 Exo可以分泌影響細胞增殖信號通路的腫瘤壞死因子（TNF）-α。通過BLI（p<0.001）和CCK-8測定（p<0.001）證實NK-92Exo對體外B16F10/effluc細胞的抗腫瘤作用。此外，在正常健康細胞中，即使在共培養(yǎng)24小時后，NK-92Exo也沒有顯示出顯著的副作用。在體內(nèi)實驗中，與對照組相比，載體對照組腫瘤顯著增加（p<0.05）。

結(jié)論：目前研究的結(jié)果表明，來自NK細胞的外泌體對黑素瘤細胞產(chǎn)生細胞毒作用，因此值得進一步發(fā)展為癌癥的潛在免疫治療策略。

參考文獻：

Liya Zhu, Senthilkumar Kalimuthu, Prakash Gangadaran, Ji Min Oh, Ho Won Lee, Se Hwan Baek, Shin Young Jeong, Sang-Woo Lee, Jaetae Lee, and Byeong-Cheol Ahn. Exosomes Derived From Natural Killer Cells Exert Therapeutic Effect in Melanoma. Theranostics. 2017; 7(10): 2732–2745. Published online 2017 Jul 7. doi:  10.7150/thno.18752

文獻下載：http://www.exosome.com.cn/thread-1729-1-1.html

文章來源于外泌體資訊網(wǎng)